專利數(shù)據(jù)洞察：新型冠狀病毒檢測(cè)診斷技術(shù)研發(fā)指引

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原標(biāo)題：專利數(shù)據(jù)洞察：新型冠狀病毒檢測(cè)診斷技術(shù)研發(fā)指引

北京知識(shí)產(chǎn)權(quán)運(yùn)營(yíng)管理有限公司（簡(jiǎn)稱“北京IP”）通過(guò)專利信息情報(bào)分析，識(shí)別出與新型冠狀病毒肺炎檢測(cè)診斷技術(shù)相關(guān)的北京企業(yè)與高校院所，并向企業(yè)和高校院所等研發(fā)主體定向、精準(zhǔn)推送具有創(chuàng)新啟示的專利技術(shù)信息，幫助研發(fā)人員尋找技術(shù)突破點(diǎn)，加快研發(fā)進(jìn)程。

一、北京相關(guān)創(chuàng)新主體

基于專利申請(qǐng)情況，識(shí)別、篩選出開(kāi)展過(guò)冠狀病毒檢測(cè)診斷技術(shù)相關(guān)研究的北京企業(yè)及高校院所。專利數(shù)據(jù)樣本取自由中國(guó)專利信息中心與國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局專利審查協(xié)作北京中心共同開(kāi)發(fā)的新型冠狀病毒感染肺炎防疫專利信息共享平臺(tái)。

（一）北京企業(yè)

專利大數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示，在冠狀病毒檢測(cè)診斷技術(shù)方面，北京共有13家企業(yè)（詳見(jiàn)表一）向國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局提交過(guò)16件中國(guó)專利申請(qǐng)，其中博奧生物有限公司3件，北京科興生物制品有限公司2件，其余11家企業(yè)均有1件相關(guān)專利申請(qǐng)。

表一：具有冠狀病毒檢測(cè)診斷技術(shù)相關(guān)中國(guó)專利申請(qǐng)的北京企業(yè)

專利數(shù)據(jù)洞察：新型冠狀病毒檢測(cè)診斷技術(shù)研發(fā)指引

注：排名不分先后

（二）北京高校院所

專利大數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示，北京共有25家高校院所（詳見(jiàn)表二）向國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局提交過(guò)冠狀病毒檢測(cè)診斷技術(shù)相關(guān)中國(guó)專利申請(qǐng)。

此外，中國(guó)人民解放軍第三0二醫(yī)院也提交過(guò)1件冠狀病毒檢測(cè)診斷技術(shù)相關(guān)中國(guó)專利申請(qǐng)。

表二：具有冠狀病毒檢測(cè)診斷技術(shù)相關(guān)中國(guó)專利申請(qǐng)的北京高校院所

序號(hào)	申請(qǐng)人
1	中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所
2	中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院
3	中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所
4	中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所
5	中國(guó)疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所
6	清華大學(xué)
7	中國(guó)科學(xué)院電子學(xué)研究所
8	北京市農(nóng)林科學(xué)院
9	北京大學(xué)
10	中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所
11	中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所
12	中國(guó)人民解放軍疾病預(yù)防控制中心
13	中國(guó)人民解放軍疾病預(yù)防控制所
14	中國(guó)人民解放軍防化指揮工程學(xué)院
15	中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院病原生物學(xué)研究所
16	中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所
17	中國(guó)科學(xué)院動(dòng)物研究所
18	中國(guó)科學(xué)院微生物研究所
19	中國(guó)科學(xué)院生物物理研究所
20	中國(guó)科學(xué)院過(guò)程工程研究所
21	中國(guó)進(jìn)出口商品檢驗(yàn)技術(shù)研究所
22	中央民族大學(xué)
23	北京交通大學(xué)
24	北京化工大學(xué)
25	北京市神經(jīng)外科研究所

注：排名不分先后

二、技術(shù)研發(fā)啟示

根據(jù)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局發(fā)布的《抗擊新型冠狀病毒肺炎專利信息研報(bào)》，北京IP摘出冠狀病毒免疫學(xué)檢測(cè)法、核酸檢測(cè)法以及檢測(cè)儀器相關(guān)的22篇重點(diǎn)專利文獻(xiàn)，通過(guò)人工逐篇解讀并翻譯美、日、韓等外文專利文獻(xiàn)，提煉出“要解決的技術(shù)問(wèn)題或有益效果”、“所采取的技術(shù)方案”、“技術(shù)用途或應(yīng)用領(lǐng)域”等關(guān)鍵信息，以期為新型冠狀病毒檢測(cè)新技術(shù)新產(chǎn)品開(kāi)發(fā)提供創(chuàng)新啟示，幫助研發(fā)人員尋找技術(shù)突破口，加快研發(fā)進(jìn)程。

值得一提的是，從《抗擊新型冠狀病毒肺炎專利信息研報(bào)》中篩選出的22篇重點(diǎn)專利文獻(xiàn)，有部分是已失效或?qū)徶?a href='http://tjjsmcc.com/search_zhuanli.html' target='_blank'>專利，但其對(duì)新冠病毒檢測(cè)技術(shù)研發(fā)仍具有參考價(jià)值，且失效專利技術(shù)還可無(wú)償使用。

（一）免疫學(xué)檢測(cè)法

免疫學(xué)檢測(cè)法是借助抗原和抗體在體外特異結(jié)合后出現(xiàn)的各種現(xiàn)象，對(duì)樣品中的抗原或抗體進(jìn)行定性、定量、定位的檢測(cè)。

1.通過(guò)病毒抗原的固相化來(lái)檢測(cè)病毒抗體

專利文獻(xiàn)CN1177224C將 SARS 冠狀病毒全病毒裂解液作為包被抗原用于檢測(cè)，CN1483737A 重組表達(dá)了 SARS 病毒特有蛋白質(zhì)和多肽片段，但后者通過(guò)具有特定氨基酸序列的蛋白質(zhì)來(lái)測(cè)定抗體，相對(duì)于 CN1177224C，其特異性和靈敏度有了進(jìn)一步提升。通過(guò)抗原表位篩選、蛋白重組表達(dá)等手段可以有效提高血清免疫學(xué)檢測(cè)的特異性和靈敏度。

表三：專利文獻(xiàn)CN1177224C重要信息解讀

表四：專利文獻(xiàn)CN1483737A重要信息解讀

2.抗體的篩選制備方法的改進(jìn)

（1）抗體表位的選擇上以 S、NP 蛋白為主

專利文獻(xiàn)CN102690336A 將蝙蝠 SARS 樣冠狀病毒的刺突蛋白（S蛋白）切割成多段，免疫動(dòng)物后，利用完整 S 蛋白的單克隆抗體鑒定小鼠抗 S 單克隆抗體表位，并制備相應(yīng)的檢測(cè)用抗體。CN100504391C 中利用基因工程重組抗原，獲得了 SARS冠狀病毒 S、N、M、E 蛋白，并制備了偶聯(lián)上述蛋白的抗體的免疫微球。JP2017145246A 以 MERS 冠狀病毒最為保守且明顯區(qū)別于其他冠狀病毒的 NP 蛋白肽作為免疫原制備檢測(cè)抗體。WO2019066389A1 將 MERS 冠狀病毒的 NP 蛋白的 N 端和 C端構(gòu)建融合蛋白，免疫小鼠并篩選單克隆抗體，用于 MERS病毒感染的檢測(cè)。上述對(duì)血清抗原的檢測(cè)相對(duì)于血清抗體的檢測(cè)，能夠在檢測(cè)對(duì)象病毒感染初期即作出診斷，在病毒暴發(fā)高峰階段半定量地區(qū)分陽(yáng)性或陰性樣本。

表五：專利文獻(xiàn)CN102690336A重要信息解讀

表六：專利文獻(xiàn)CN100504391C重要信息解讀

表七：專利文獻(xiàn)JP2017145246A重要信息解讀

表八：專利文獻(xiàn)WO2019066389A1重要信息解讀

（2）采用新型冠狀病毒肺炎康復(fù)患者的 PBMC 構(gòu)建抗體庫(kù)或計(jì)算機(jī)模擬病毒表位等

專利文獻(xiàn)US10421802B2將健康人PBMC構(gòu)建噬菌體抗體庫(kù)，以S蛋白受體結(jié)構(gòu)域（RBD）淘選富集單克隆抗體，但以康復(fù)病人的PBMC構(gòu)建抗體庫(kù)，淘選效率會(huì)更高。US2010075300A1將接受病毒疫苗的人類(lèi)患者的接種前和接種后的血清樣品施加到包被有病毒樣顆粒（VLP）的生物傳感器芯片上進(jìn)行檢測(cè)。該專利申請(qǐng)的研究重點(diǎn)在于：對(duì)待測(cè)病毒樣顆粒進(jìn)行構(gòu)建，以提高檢測(cè)的靈敏度同時(shí)降低生物風(fēng)險(xiǎn)；對(duì)檢測(cè)平臺(tái)本身的改進(jìn)，同樣在于提高檢測(cè)靈敏度和檢測(cè)速度。

表九：專利文獻(xiàn)US10421802B2重要信息解讀

表十：專利文獻(xiàn)US20100075300A1重要信息解讀

（二）核酸檢測(cè)法

核酸檢測(cè)法是通過(guò)對(duì)生物樣品中病原物質(zhì)進(jìn)行基因測(cè)序，從而做出診斷結(jié)果的檢測(cè)方法。

核酸檢測(cè)法主要是改進(jìn) RT-PCR 的靈敏度和特異性，例如US2018127836A1 鑒定了冠狀病毒在感染細(xì)胞中存在的高拷貝數(shù)的高度保守的若干短 RNA 序列，例如非翻譯區(qū)的前導(dǎo)序列，這些前導(dǎo)序列是 MERS 冠狀病毒基因組中表達(dá)最豐富的基因區(qū)域，可以引入鎖核酸探針對(duì)其進(jìn)行 RT-PCR LNA 擴(kuò)增，可以考慮增加前到序列作為檢測(cè)靶標(biāo)。US2019203280A1 公開(kāi)了一種增加核酸擴(kuò)增靈敏度和特異性的方法，包括添加失活的 cas9 和結(jié)合于靶基因的引導(dǎo) RNA（CRISPR 介導(dǎo)的生物敏感器）。US2011027862A1 公開(kāi)了在含有 SARS 等冠狀病毒 RNA的樣本中加入鹽酸胍和不超過(guò) 20mM 的金屬離子，能夠穩(wěn)定RNA，可考慮用于檢測(cè)樣本的運(yùn)送過(guò)程中。US10421802B2 使用蘇拉明、Sso7d、AluI 甲基化酶和/或 poly(rA)(dT)n 等物質(zhì)減少 RT-PCR 中的逆轉(zhuǎn)錄抑制。WO2013049891A1 通過(guò)將不同大小的珠粒子集標(biāo)記不同的特異性核苷酸探針來(lái)實(shí)現(xiàn)呼吸道病原體的檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)了菌體或病毒的高通量篩選，解決了目前 PCR 缺乏有效地處理大量含多個(gè)靶的樣品的高通量檢測(cè)能力的問(wèn)題。該專利技術(shù)明確指出了包含珠粒的 PCR 系統(tǒng)可能會(huì)成為 RT-PCR 的一個(gè)發(fā)展方向，也為大樣本、高通量檢測(cè)提供了技術(shù)啟示。

WO2019178188A1則提供了一種面向使用者的即時(shí)床旁診斷系統(tǒng)，用專門(mén)設(shè)計(jì)的引物組和探針進(jìn)行重組酶聚合酶測(cè)定（RPA），可實(shí)現(xiàn)包括 SARS 在內(nèi)的多種病毒的即時(shí)床旁檢測(cè)。該專利申請(qǐng)實(shí)際上也提出了一種設(shè)想，即將便攜式的檢測(cè)設(shè)備設(shè)置在隔離空間，利用物聯(lián)網(wǎng)技術(shù)將其與診斷中心相連；在檢測(cè)時(shí)，患者在隔離空間內(nèi)自行提供樣品（例如鼻拭子、唾液或痰液），設(shè)備檢測(cè)出數(shù)據(jù)后傳送給診斷中心；再由診斷中心的醫(yī)師給出結(jié)論。這樣的設(shè)置可以極大地減輕醫(yī)護(hù)人員感染的風(fēng)險(xiǎn)，為實(shí)現(xiàn)快速、即時(shí)和遠(yuǎn)程檢測(cè)提供了一種思路。我國(guó)在 5G 技術(shù)方面具有世界領(lǐng)先的優(yōu)勢(shì)，實(shí)現(xiàn)該專利構(gòu)想的技術(shù)基礎(chǔ)已經(jīng)存在，此項(xiàng)技術(shù)的實(shí)施無(wú)疑對(duì)提高現(xiàn)在的疫情防控能力以及今后的傳染性疾病檢測(cè)的生物安全性給出了很好的啟示。

表十一：專利文獻(xiàn)US20180127836A1重要信息解讀

表十二：專利文獻(xiàn)US20190203280A1重要信息解讀

表十三：專利文獻(xiàn)US20110027862A1重要信息解讀

表十四：專利文獻(xiàn)US10301675B2重要信息解讀

表十五：專利文獻(xiàn)WO2013049891A1重要信息解讀

表十六：專利文獻(xiàn)WO2019178188A1重要信息解讀

（三）冠狀病毒檢測(cè)儀器

本節(jié)選取了代表 PCR 檢測(cè)儀器前沿技術(shù)的三個(gè)技術(shù)分支，包括集成化小型 PCR 分析儀、微流控 PCR 分析儀以及自動(dòng)化 PCR 檢測(cè)系統(tǒng)，試圖通過(guò)分析為研發(fā)重點(diǎn)工作提供參考。

1、集成化小型 PCR 分析儀

集成化小型 PCR 分析儀的研發(fā)側(cè)重于裝置的全封閉、一體化，避免氣溶膠的產(chǎn)生。集成化小型 PCR 分析儀的定位是便于基層醫(yī)院和中小型實(shí)驗(yàn)室的應(yīng)用，因此，可以將分析儀設(shè)計(jì)成管式、卡式、盤(pán)式等，使得用戶通過(guò)簡(jiǎn)單的按壓、推拉、擰動(dòng)即可完成全程操作；簡(jiǎn)化信號(hào)讀取裝置，例如通過(guò)線、點(diǎn)、變色、濁度等變化反映目標(biāo)核酸的存在。可以利用國(guó)內(nèi)在制造業(yè)方面的優(yōu)勢(shì)，對(duì)集成化小型 PCR分析儀的各個(gè)模塊進(jìn)行合理設(shè)計(jì)和布置，使得儀器的體積進(jìn)一步縮小，例如通過(guò)巧妙設(shè)置各模塊的空間位置、合理優(yōu)化流體管路等使得裝置更加緊湊、小巧。

例如CN101970111B 和 CN103269787B9 另辟蹊徑，放棄了通常所采用的移液設(shè)備，而采用其他方式實(shí)現(xiàn)試劑或者樣品在不同模塊之間的傳遞，例如用不同的腔室或者區(qū)域代替?zhèn)鹘y(tǒng)的反應(yīng)容器，通過(guò)例如氣泵、磁場(chǎng)等實(shí)現(xiàn)試劑或者樣品在密閉環(huán)境下的轉(zhuǎn)移。如此設(shè)計(jì)的優(yōu)勢(shì)在于：（1）避免了氣溶膠的產(chǎn)生，減少了污染，保障了實(shí)驗(yàn)室環(huán)境和檢測(cè)人員的生物安全；（2）由于不需要移液設(shè)備以及使液體在不同模塊之間轉(zhuǎn)移的傳動(dòng)系統(tǒng)，檢測(cè)儀器的體積大為縮?。唬?）通過(guò)對(duì)各個(gè)反應(yīng)模塊相互位置的優(yōu)化設(shè)計(jì)，而不局限傳統(tǒng)的線性或者模塊式排列，極大程度上實(shí)現(xiàn)集成化、小型化。

表十七：專利文獻(xiàn)CN101970111B重要信息解讀

表十八：專利文獻(xiàn)CN103269787B9重要信息解讀

2、微流控 PCR 分析儀

微流控PCR分析儀方面的改進(jìn)主要是實(shí)現(xiàn)整體微流控PCR分析儀的全封閉和緊湊化，適應(yīng)POCT（即時(shí)檢測(cè)）的需要；提高檢測(cè)精度和檢測(cè)通量；進(jìn)一步降低生產(chǎn)成本。

例如，根據(jù)CN109072292A和CN110743637A所描述的，對(duì)微流控芯片進(jìn)行高度集成化和全封閉的設(shè)計(jì)，能夠?qū)⒉《镜奶崛?、分離、擴(kuò)增以及在線檢測(cè)集成在微尺度的芯片上；除了取樣操作外，操作人員只需要將采集好樣本的微流控芯片插入配套檢測(cè)儀器中，利用卡扣結(jié)構(gòu)等密封加樣孔，之后所有的樣品處理和反應(yīng)過(guò)程均由檢測(cè)儀器自動(dòng)完成，不需要人為干預(yù)，就避免了人為操作帶來(lái)的交叉污染以及氣溶膠污染問(wèn)題。另外，通過(guò)在芯片的微流體通道中設(shè)置不同溫度區(qū)域，實(shí)現(xiàn)溫度調(diào)節(jié)，從而精確控制PCR分析儀的擴(kuò)增環(huán)節(jié)；通過(guò)改進(jìn)流體驅(qū)動(dòng)控制技術(shù)，包括微通道、微閥、微泵等的精細(xì)加工，或采用離心力、擠壓囊泡、電驅(qū)動(dòng)等方式精確控制芯片內(nèi)的液體流動(dòng)，從而定量控制核酸檢測(cè)中的流體體積；可以對(duì)芯片基底材料進(jìn)行進(jìn)一步的選擇和處理，例如對(duì)基底材料進(jìn)行化學(xué)處理，使其既能適用于微流控的流體操控又能降低生產(chǎn)成本。

表十九：專利文獻(xiàn)CN109072292A重要信息解讀

表二十：專利文獻(xiàn)CN110743637A重要信息解讀

3、自動(dòng)化 PCR 檢測(cè)系統(tǒng)

自動(dòng)化PCR檢測(cè)系統(tǒng)研發(fā)的重點(diǎn)主要是以移液平臺(tái)為基礎(chǔ)，通過(guò)集成、擴(kuò)展的方式滿足自動(dòng)化核酸檢測(cè)中的自動(dòng)移液需求；通過(guò)空氣過(guò)濾、分隔空間、改進(jìn)移液系統(tǒng)等方式防止氣溶膠污染；通過(guò)不同模塊之間的傳送系統(tǒng)、機(jī)械臂、計(jì)算機(jī)處理系統(tǒng)等來(lái)實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化控制，使得各個(gè)模塊集成化、自動(dòng)化以形成大型的工作站或者操作平臺(tái)，最大限度地減少手工操作。

例如CN102141572B中不同的模塊設(shè)置不同的、具有壓差的氣流系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)各個(gè)模塊間的空氣隔絕，避免了交叉污染和氣溶膠的泄漏。CN105188938B和CN103119451B的目的均是為了實(shí)現(xiàn)高通量檢測(cè)，尤其是CN103119451B通過(guò)優(yōu)化自動(dòng)化系統(tǒng)的內(nèi)部結(jié)構(gòu)和自動(dòng)化檢測(cè)流程，提高了單位時(shí)間內(nèi)的檢測(cè)通量，其發(fā)明構(gòu)思類(lèi)似于現(xiàn)有技術(shù)中同時(shí)檢測(cè)血常規(guī)和C反應(yīng)蛋白（CRP）的生化分析儀，它們的目的都是為了提高檢測(cè)效率，可以在單位時(shí)間內(nèi)對(duì)若干個(gè)樣品進(jìn)行順序處理，提高檢測(cè)通量。另外，考慮到核酸檢測(cè)中使用的樣品、試劑通常以微升計(jì)，需要對(duì)液滴的體積進(jìn)行精確控制，因此，對(duì)于移液操作所涉及的部件例如反應(yīng)容器、支架、吸液泵、吸液頭等的結(jié)構(gòu)都可以進(jìn)行優(yōu)化，以避免由于試劑殘留、液體飛濺或滲漏等產(chǎn)生的交叉污染。這些都是國(guó)內(nèi)科研人員可以加大科研投入的方向。

表二十一：專利文獻(xiàn)CN102141572B重要信息解讀

表二十二：專利文獻(xiàn)CN105188938B重要信息解讀

表二十三：專利文獻(xiàn)CN103119451B重要信息解讀

三、小結(jié)

與以往發(fā)現(xiàn)的冠狀病毒不同，2019-nCoV 是以前從未在人體中發(fā)現(xiàn)的冠狀病毒新毒株。隨著疫情的發(fā)展，科研人員不斷探索檢測(cè)該病毒的方法，而且國(guó)家藥品監(jiān)督管理局已批準(zhǔn)多個(gè)新型冠狀病毒核酸檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品，并將其用于臨床診斷。在常規(guī)的病毒檢測(cè)方法中，免疫檢測(cè)和核酸檢測(cè)，以其高效的檢測(cè)速度和準(zhǔn)確性被普遍采用。通過(guò)對(duì)選取的254項(xiàng)專利或專利申請(qǐng)進(jìn)行技術(shù)熱點(diǎn)的分析，同樣發(fā)現(xiàn)，快速檢測(cè)病毒抗體或抗原的免疫學(xué)診斷方法仍然是病毒檢測(cè)研究的重點(diǎn)，這與免疫學(xué)診斷方法相對(duì)于其他方法更為快捷方便有關(guān)；而核酸檢測(cè)法由于其極高的準(zhǔn)確度，同樣也是研究的重點(diǎn)。分析結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，各檢測(cè)方法中的基本原理并沒(méi)有太大變化，但在提高檢測(cè)效率、精度以及擴(kuò)展檢測(cè)適用條件方面進(jìn)行了不斷改進(jìn)。

針對(duì)新型冠狀病毒檢測(cè)方法的研究，應(yīng)廣泛搜集現(xiàn)有的高靈敏度檢測(cè)平臺(tái)，利用檢測(cè)靶點(diǎn)的替換研究其與新型冠狀病毒檢測(cè)的結(jié)合可能，提高病原體檢測(cè)的靈敏度。關(guān)注研發(fā)新型載體，例如微珠等，并基于微珠 PCR 的高通量檢測(cè)技術(shù)開(kāi)發(fā)。積極開(kāi)發(fā)等溫或常溫PCR 體系以及配套的樣品自動(dòng)處理儀器，以降低對(duì)檢測(cè)條件的要求，使得檢測(cè)儀器能夠結(jié)合物聯(lián)網(wǎng)技術(shù)。集成化小型 PCR分析儀的研發(fā)應(yīng)側(cè)重于裝置的全封閉、一體化，避免氣溶膠的產(chǎn)生，全封閉和緊湊化是微流控技術(shù)的研究方向。

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專利數(shù)據(jù)洞察：新型冠狀病毒檢測(cè)診斷技術(shù)研發(fā)指引

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